使用灭蝇灯应悬挂于距地面1.8米左右。使用灭蝇灯时，灭蝇灯的下端离地面应大于0.5米，顶部离天花板大于0.5米，设置中端高度在离地1.8米左右，可达到较佳的灭蝇效果。另外在使用灭蝇灯时，关闭其它灯光也可提高灭杀效果。

灭蝇灯按捕杀的功能可分为电击式和粘捕式，其原理均是用光线引诱虫蝇，诱使虫蝇靠近灭蝇灯灯管。

使昆虫接触灭蝇灯附近的高压电栅栏或粘蝇纸，将其电死或粘住，达到杀灭虫蝇的目的。

安置灭蝇灯使，灭蝇灯应避免直接面对门窗等，防止出现吸引外界虫蝇的情况。在食品处理环境里应避免使用电击式灭蝇灯，避免虫尸被电击炸飞。