科学家劳米-拉佩斯：
　　
　　文弱博士变强悍战士
　　
　　1979年《异形》还捧红了女主角西格妮-韦弗，她独抗怪物的强悍是每集《异形》必备的场景，也让她成为上世纪八九十年代著名的动作女星。这次《普罗米修斯》没有西格妮-韦弗，不过斯科特再次一反好莱坞贯常出现的男性沙文主义，依然为电影设置了一位同样彪悍的女主角。全片最重要主角找来以《龙文身的女孩》走红的瑞典女星劳米-拉佩斯担纲，解决危机的一切希望都寄托在她的角色伊莉莎白身上，透过这位女性角色来展现人类生命力、意志力、勇气的极限，与《异形》系列中由西格妮-韦弗饰演的雷普莉有异曲同工之妙。
　　
　　劳米-拉佩斯主演的瑞典版《龙文身女孩》三部曲深受欢迎，并在世界范围内建立起知名度，导演雷德利-斯科特也借由此片认识了她。《普罗米修斯》中劳米饰演的伊莉莎白是一个博学多闻但纤弱的考古学博士，外星寻根旅程中不同的冲击相继而来，她也释放出隐藏在内心的坚强毅力，在遇见不明生物造成威胁时竟能够空手奋战。为了这个角色，劳米接受了大量的体能训练，再加上先前在《龙文身的女孩》里所累积的武术经验，她也被雷德利-斯科特打造成一个全能女战士！
　　
　　不过劳米饰演的伊莉莎白一角在刻意用不同处理手法与西格妮-韦弗划清界限，雷德利说：“西格妮在《异形》中是个非特定的低阶军官，她在船上做什么？你以为她在第一幕就会死。反之，伊莉莎白则是一名不只具备纯科学专业，其实还有信念的科学家。她深信一切事物的立足点，架构在我们是由某种事物创造的想法上。”劳米则认为伊莉莎白比雷普利更女性化，“我认为雷普利从一开始处境艰难，因为她独自一人。伊莉莎白则与哈洛威一起开始这段旅程，而她爱他。他们是一个团队，而且他们合力做这件事。”
　　
　　生化人法斯宾德：
　　
　　雌雄同体大家都爱
　　
　　《普罗米修斯》是帝迈克尔-法斯宾德今年的代表作，闯荡影艺圈10多年的法斯宾德近年来人气不断攀升，在《X战警：第一战》、《无耻混蛋》等卖座片都有不俗演出，去年他还因《羞耻》获得威尼斯影帝。《普罗米修斯》中他饰演的是一个具有人类面貌体型的生化人大卫，对世界充满好奇，同时拥有高智慧头脑，兼具男性的刚强以及女性的阴柔思维。《普罗米修斯》中法斯宾德饰演的生化人眼神无邪，是众人都希望能拥有的最佳伴侣。
　　
　　为了演出生化人大卫，法斯宾德先从走路的姿势做起，以上世纪80年代美国跳水名将洛加尼斯跳水前的行进模式为主，加入瑜珈的动作以及中性的姿态，融合出自己的独特风格，精巧而纤细。（影评）他是“普罗米修斯号”上的太空管家，他头脑精密聪明，但因为“非人”的身分，令他不时怀疑自我的存在价值，就如同人类对整个宇宙提出的疑问一般，所有的人都在寻找这个答案。
　　
　　雷德利-斯科特当初是看了《X战警：第一战》后便力邀法斯宾德参与《普罗米修斯》的演出，另一位主角影后查理兹-赛隆则在共同演出过程中和他成为无话不谈的好朋友，两人合作演出默契十足，数度也有彼此互有好感的绯闻传出。